當(dāng)前所在頁(yè)面：一、紫外燈殺菌效果檢查
紫外燈在使用過(guò)程中輻射強(qiáng)度會(huì)逐漸降低，會(huì)影響其殺菌效果，故應(yīng)該定期檢測(cè)。紫外燈的殺菌有效波長(zhǎng)是253.7 nm,其強(qiáng)度可以用中心波長(zhǎng)254 nm的紫外線強(qiáng)度計(jì)測(cè)定。在沒(méi)有紫外線強(qiáng)度計(jì)的情況下可以采用生物學(xué)測(cè)試代替。
生物學(xué)測(cè)試簡(jiǎn)要步驟如下：選用枯草芽孢桿菌ATCC 9372,制成106CFU/mL~108 CFU/mL濃度的菌懸液；選用經(jīng)脫脂處理的0.5 cm x 1.0cm大小的布片或鋁片，高壓滅菌后用作載體；每個(gè)載體上滴一滴制備好的菌懸液，干燥后備用；將8個(gè)染菌載體放于無(wú)菌器皿中，置于紫外燈下1 m~1. 5 m處，開(kāi)啟紫外燈照射，于0.5h、 1 h、 1.5h和2h各取出2個(gè)染菌載體，分別投入盛有5ml.緩沖蛋白胨水的洗脫液；系列稀釋后進(jìn)行平板計(jì)數(shù)；同法取8個(gè)染菌載體用做陽(yáng)性對(duì)照，操作除不經(jīng)紫外線照射外與試驗(yàn)組相同。
殺滅率 =(陽(yáng)性對(duì)照回收菌數(shù)-試驗(yàn)組回收菌數(shù))×100% / 陽(yáng)性對(duì)照回收菌數(shù)殺滅率大于99.9%時(shí)，認(rèn)為紫外燈殺菌效果合格。
二、無(wú)菌室空氣質(zhì)量檢查
無(wú)菌室空氣質(zhì)量的檢查應(yīng)按照采樣計(jì)劃，根據(jù)情況對(duì)處于空態(tài)、靜態(tài)或正常運(yùn)行的風(fēng)險(xiǎn)區(qū)，使用適當(dāng)?shù)膬x器采集空氣中微生物，測(cè)定并監(jiān)測(cè)風(fēng)險(xiǎn)區(qū)空氣的微生物污染。無(wú)菌室空氣質(zhì)量的檢查可以參考GB/T 16293 《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))浮游菌的測(cè)試方法》和GB/T 25915.7《潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境 第7部分：隔離裝置(潔凈風(fēng)罩、手套箱、隔離器、微環(huán)境)》。
空氣懸浮微生物的采樣和計(jì)數(shù)方法多種多樣，根據(jù)所需采樣目的決定具體的采樣方法和采樣器。因采樣器的采集效率不同，應(yīng)慎重選擇合適的方法和設(shè)備。
采樣器分為兩類(lèi)：被動(dòng)式采樣器，如落菌盤(pán)；主動(dòng)式采樣器，如濾過(guò)采樣器、撞擊采樣器、沖擊采樣器等。
1、沉降法
落菌盤(pán)等被動(dòng)式空氣微生物采樣器不能測(cè)量空氣中微生物的總數(shù)，而是測(cè)量空氣中微生物在表面的沉降率。只要確定單位時(shí)間落菌盤(pán)上微生物的數(shù)量，再根據(jù)落菌盤(pán)的暴露面積與暴露時(shí)間之間的關(guān)系，即可大致計(jì)算出空氣中微生物的數(shù)量。
面積小于30 m2的室內(nèi)設(shè)一對(duì)角線取3點(diǎn)，在其中心及兩端距墻1 m處各取一點(diǎn)；面積大于30 m2的室內(nèi)房間四面距墻1 m和中央各放置一個(gè)平皿，高度為實(shí)驗(yàn)臺(tái)的高度。培養(yǎng)基平皿開(kāi)蓋暴露10 min,然后蓋蓋倒放，培養(yǎng)48 h,計(jì)數(shù)每個(gè)平1上的菌落數(shù)。
日常監(jiān)控時(shí)，可以設(shè)定可接受的菌落數(shù)限值。一般無(wú)菌室的所有取樣平皿上的細(xì)菌總數(shù)應(yīng)小于15個(gè)�？諝赓|(zhì)量良好的無(wú)菌室，通常每個(gè)平皿上生長(zhǎng)的細(xì)菌不超過(guò)2個(gè)。
也可以按式(10-2)估算空氣中的細(xì)菌濃度：
C=（50000 x N ）/ （A × t）.......( 10-2)
式中：
C一空氣中的細(xì)菌濃度，單位為菌落集成單位每立方米(CFU/m3)；
A--平板面積，單位為平方厘米(cm2)；
t一平板暴露時(shí)間，單位為分鐘(min)；
N-平均菌落數(shù)，單位為每1L (CFU/L)。
2、空氣濾過(guò)法
空氣采樣除了自然沉降法外，還可以使用專(zhuān)門(mén)的主動(dòng)式采樣器。主動(dòng)式采樣器可以評(píng)估 風(fēng)險(xiǎn)區(qū)空氣微生物特征。主動(dòng)式采樣器主要包括撞擊采樣器、濾過(guò)采樣器和沖擊采樣器等。
撞擊采樣器可以分為狹縫式采樣器、離心式采樣器和針孔式采樣器。狹縫式采樣器由附加的真空抽氣泵抽氣，通過(guò)采樣器的縫隙式平板，將采集的空氣噴射并撞擊到緩慢旋轉(zhuǎn)的平板培養(yǎng)基表面上，附著的活微生物粒子經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落，予以計(jì)數(shù)。離心式采樣器由于內(nèi)部風(fēng)機(jī)的高速旋轉(zhuǎn)，氣流從采樣器前部吸入從后部流出，在離心力的作用下，空氣中的活微生物粒子有足夠的時(shí)間撞擊到專(zhuān)用的固形培養(yǎng)條上，經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落，予以計(jì)數(shù)。
過(guò)濾式空氣采樣器是最常用的、最簡(jiǎn)單的空氣采樣器。過(guò)濾式采樣器由采樣頭、濾器、流量計(jì)和抽氣泵組成。
開(kāi)動(dòng)電機(jī)后，抽氣泵工作，帶動(dòng)空氣吸入采樣頭，空氣通過(guò)濾器的時(shí)候，大于濾膜孔徑的顆粒就被阻留，當(dāng)達(dá)到預(yù)先設(shè)定吸氣體積后抽氣泵停止工作，將濾膜取出轉(zhuǎn)貼到培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后計(jì)算空氣中的微生物濃度。過(guò)濾式采樣器捕獲效率高，但是濾膜材料可能影響微生物的存活率，還有采樣阻力大、流量易變的缺陷。
三、無(wú)菌室物體表面微生物污染檢查
表面微生物污染的檢查需要使用接觸器或拭子，獲得某表面某時(shí)間點(diǎn)的微生物數(shù)量。
接觸器以容器內(nèi)已知面積的固態(tài)營(yíng)養(yǎng)介質(zhì)與表面接觸，接觸面積應(yīng)大于20 cm2,均勻用力將整個(gè)營(yíng)養(yǎng)介質(zhì)壓住表面幾秒鐘，不得移動(dòng)。然后將裝置放回容器內(nèi)，再清潔被采樣表面，清除殘留營(yíng)養(yǎng)物。接觸器培養(yǎng)后顯現(xiàn)的菌落可以給出原表面微生物存活狀況的鏡像“圖”。
使用拭子更為簡(jiǎn)單和靈活，用拭子擦拭某個(gè)表面，它抹去的微生物數(shù)量就可計(jì)算出了。對(duì)接觸裝置觸及不到的、不平或有凹陷的非吸收性大表面，用拭子采樣特別方便。棉拭子的操作方法如下：
準(zhǔn)備材料：自制無(wú)菌棉拭子或購(gòu)買(mǎi)商品化的無(wú)菌棉拭子(見(jiàn)圖10-12)、內(nèi)徑10cm x 10 cm無(wú)菌規(guī)格板、無(wú)菌生理鹽水、培養(yǎng)基平皿。
如果取樣物體是平面的，將無(wú)菌規(guī)格板放在物體表面，用浸濕的無(wú)菌棉拭子在無(wú)菌規(guī)格板空心處橫豎涂抹均勻，涂抹時(shí)隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭子，剪去棉拭子與手接觸部分，將棉拭子放入裝有一定體積的無(wú)菌生理鹽水中待檢。
采樣管敲打80次以上使棉拭子上的細(xì)菌充分?jǐn)U散，作適當(dāng)稀釋?zhuān)M(jìn)行平板計(jì)數(shù)，37 ℃培養(yǎng)48 h計(jì)數(shù)，見(jiàn)式(10-3)。
細(xì)菌總數(shù)(CFU/m2)=（平皿上菌落平均數(shù) × 稀釋倍數(shù) ）/采樣面積 (cm2).......( 10-2)
【例10.1】某操作臺(tái)面采樣面積100 cm2 ,棉拭子放入10 mL生理鹽水，從中取1 mL檢測(cè)，平皿上平均菌落數(shù)為5個(gè)。則細(xì)菌總數(shù)為：
5x10/100=0. 5(CFU/cm2)
如果取樣物品表面不規(guī)則或者物品采樣面積不足100 cm2 ,取整件物品進(jìn)行棉拭子涂抹取樣，其余步驟同上，見(jiàn)式(10-4)。細(xì)菌總數(shù)(CFU/件) =平皿上菌洛平均數(shù)×稀釋倍數(shù) / 件.......(10-4)
四、人員接觸面無(wú)菌檢查
人員與檢測(cè)對(duì)象的接觸面主要是手。
被檢人員洗手消毒后，五指并攏。將浸泡過(guò)的棉拭子沿雙手指屈面從指根到指端往返涂擦2次(每只手涂擦面積約30cm2),涂擦的同時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭子。剪去操作者手接觸部位，將棉拭子放入裝有一定體積的無(wú)菌生理鹽水中待檢。
按“無(wú)菌室物體表面細(xì)菌污染檢查”的方法進(jìn)行樣品處理、接種、培養(yǎng)、計(jì)數(shù)和報(bào)告結(jié)果。
