實(shí)驗(yàn)室是進(jìn)行科研工作的必需場所,根據(jù)危險(xiǎn)度等級,包括傳染病原的傳染性和危害性,國際上將生物實(shí)驗(yàn)室按照生物安全水平英文是Biosafety level,簡稱BSL,分為P1、P2、P3和P4四個(gè)等級。
P1-P4實(shí)驗(yàn)室可以承擔(dān)的工作也根據(jù)安全等級進(jìn)行劃分,其嚴(yán)格等級從低到高。
P1實(shí)驗(yàn)室又稱基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室,適合對人體、動植物或環(huán)境危害較低,不具有對健康成人,動植物致病的因子。
P2實(shí)驗(yàn)室又稱基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室,適用于對人體、動植物或環(huán)境具有中等危害或具有潛在危險(xiǎn)的致病因子,對健康成人、動物和環(huán)境不會造成嚴(yán)重危害,有有效的預(yù)防和治療措施。
P3實(shí)驗(yàn)室又稱防護(hù)實(shí)驗(yàn)室,適用于處理對人體、動植物或環(huán)境具有高度危害性,通過直接接觸或氣溶膠使人傳染上嚴(yán)重甚至是致命的疾病,或?qū)又参锖铜h(huán)境具有高度危害的致病因子,通常有預(yù)防和治療措施。
P4實(shí)驗(yàn)室是最高級別防護(hù)實(shí)驗(yàn)室,適用于對人體、動植物或環(huán)境具有高度危害性,通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明,或未知的、高度危險(xiǎn)的致病因子。沒有預(yù)防和治療措施。比如埃博拉病毒、HIV。
那么,核酸檢測在P3實(shí)驗(yàn)室是如何進(jìn)行的呢?核酸檢測是確診新冠肺炎的“金標(biāo)準(zhǔn)”,而檢測流程中的每一個(gè)環(huán)節(jié)都是精細(xì)活,容不得半點(diǎn)馬虎。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的檢測流程可分為5個(gè)步驟:檢測前的準(zhǔn)備工作——核對樣本信息——樣本滅活——開蓋加樣和核酸提取——PCR反應(yīng)體系配制——核酸擴(kuò)增檢測——檢測完成——高壓滅菌。
第一步,檢測前的準(zhǔn)備工作
打開樣本前,必須做好全方位的防護(hù)。在實(shí)驗(yàn)室的潔凈室,穿上隔離衣、防護(hù)服、防護(hù)口罩、護(hù)目鏡、面屏、雙層醫(yī)用乳膠手套、防水靴套,每個(gè)步驟都不能有錯。
第二步,核對樣本信息
進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室核心區(qū)后,先用75%酒精對送樣箱進(jìn)行外表面消毒,消毒完畢后核對被檢樣本姓名、性別、年齡、編號等信息。
第三步,樣本滅活
樣本將在水浴箱經(jīng)半小時(shí)56℃高溫滅活,使病毒蛋白不再有生理活性,失去感染、致病和繁殖能力。這會讓檢測時(shí)相對安全,但病毒蛋白的基因序列并沒有受到影響。
第四步,開蓋加樣和核酸提取
檢測的核心環(huán)節(jié),實(shí)驗(yàn)員拿到滅活后的樣本時(shí),第一個(gè)動作就是振蕩,盡量讓拭子上的病毒洗脫在培養(yǎng)基溶液中,再靜置5分鐘沉淀。接下來是開蓋加樣,必須人工操作,且需要兩個(gè)人高度配合才能完成。一人擰開樣本罐蓋子,另一人拿著微量移液器在樣本罐中吸取微量溶液,放到另一個(gè)提取管里,再擰上管蓋。
酸提取可以使用儀器輔助,但由于比對需要,往往要加以人工操作,需要反復(fù)進(jìn)行離心、加試劑、洗滌等10多個(gè)步驟。其中,需要打開管蓋的操作就達(dá)7次以上,完成一例人工核酸提取要50分鐘左右。
第五步,PCR反應(yīng)體系配制
走出核心實(shí)驗(yàn)區(qū),開始進(jìn)行PCR反應(yīng)體系配制,將提取的病毒核酸加入到核酸擴(kuò)增檢測試劑中。
第六步,核酸擴(kuò)增檢測
將配制好的PCR反應(yīng)物放置在熒光定量PCR儀上。在電腦上設(shè)置PCR反應(yīng)條件,運(yùn)行儀器,開始核酸擴(kuò)增檢測。
第七步,檢測完成
實(shí)時(shí)關(guān)注檢測情況,大約1.5小時(shí)后,核酸擴(kuò)增完成,進(jìn)行檢測結(jié)果判讀。至此,該樣本的新型冠狀病毒核酸檢測就算完成了,整個(gè)流程大概4小時(shí)。
還有最后一步,也是非常重要的一步,污染物的高壓滅菌處理。實(shí)驗(yàn)過程產(chǎn)生的污染物通過高壓滅菌后,按普通醫(yī)療垃圾處理。