一．總大腸菌群檢測：

1、大腸桿菌、總大腸菌群和糞大腸菌群如何區(qū)分？

問題描述：

做海水大腸桿菌的檢測，可是只找到了糞大腸菌群的檢測。三種檢測方法有什么不一樣的？好多文獻(xiàn)大腸桿菌用的就是總大腸菌群的檢測方法，不知對(duì)結(jié)果會(huì)有多少影響？

解答：

三種檢測方法是不一樣的，大腸桿菌不該用總大腸菌群的檢測方法，因?yàn)榇竽c菌群（總大腸菌群）>糞大腸菌群&耐熱大腸菌群>大腸桿菌。

a、總大腸菌群系指一群在 37℃培養(yǎng) 24 小時(shí)能發(fā)酵乳酸、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌；該菌群主要來源于人畜糞便，具有指標(biāo)菌的一般特征故以此作為糞便污染指標(biāo)評(píng)價(jià)飲水的衛(wèi)生質(zhì)量。

b、糞大腸菌群：是在胰蛋白胨肉湯中于 44.5℃，24h 內(nèi)產(chǎn)生吲哚的耐熱大腸菌群，因檢測方法比大腸桿菌簡單地多，而受到重視；用提高培養(yǎng)溫度的方法將自然環(huán)境中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區(qū)分開，在 44.5℃仍能生長的大腸菌群，稱為糞大腸菌群。是水體受人畜糞便污染的比較直接指標(biāo)。

c、大腸桿菌：細(xì)菌門。細(xì)胞桿狀，直徑約 1 微米，長約 2 微米，兩端鈍圓，周身具鞭毛，可運(yùn)動(dòng)。革蘭氏染色陰性，不形成芽孢。菌落圓形，白色或黃白色，光滑而具閃光，低平或微凸起，邊緣整齊。最適條件下培養(yǎng)20分鐘可繁殖1 代。

大腸桿菌是人和溫血?jiǎng)游锬c道內(nèi)普遍存在的細(xì)菌，是糞便中的主要菌種。一般生活在人大腸中并不致病，可能在腸中對(duì)合成維生素 K 起作用。但它侵入人體一些部位時(shí)，可引起感染，如腹膜炎、膽囊炎、膀胱炎及腹瀉等。人在感染大腸桿菌后的癥狀為胃痛、嘔吐、腹瀉和發(fā)熱。感染可能是致命性的，尤其是對(duì)孩子及老人。大腸桿菌的檢驗(yàn)是以無菌操作取 25g 樣品，放入裝有 225mL 稀釋劑的滅菌均質(zhì)杯內(nèi)，于 8000r/min 均質(zhì) 1～2min,制成 1:10 樣品勻液(也可用滅菌乳缽研磨的方法代替)。

稀釋樣品勻液根據(jù)對(duì)樣品污染情況的估計(jì)，用稀釋劑將樣品勻液制成一系列十倍遞增的樣品稀釋液，從制備樣品勻液至稀釋完畢，全過程不得超過15minLST 和EC初步篩選：對(duì)每個(gè)樣品選擇適宜的三個(gè)連續(xù)稀釋度的樣品稀釋液。

每個(gè)稀釋度接種三管月桂基硫酸鹽胰蛋白(月示)(LST)肉湯,每管接種1mL。將接種管置于 36±1℃培養(yǎng)48±2h；觀察試管的產(chǎn)氣情況：檢查倒管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生,用直徑為3mm的接種環(huán)將所有48±2h 內(nèi)產(chǎn)氣的LST肉湯管培養(yǎng)物移種于 EC 肉湯管中；將所有接種的EC肉湯管在 30min 內(nèi)放入帶蓋 44.5±0.5℃水浴箱內(nèi)培養(yǎng) 48±2h。

2、檢測總大腸菌群過程中，倒管操作的疑惑

問題描述：

第一步，乳糖發(fā)酵試驗(yàn)的時(shí)候，在開始培養(yǎng)的時(shí)候，小試管里面我感覺是一小試管的氣，到底是液體還是氣體��？

a、放小倒管，目的是看培養(yǎng)后它是否產(chǎn)生氣體。小倒管放進(jìn)去要沒有氣泡，一開始放進(jìn)去就有氣泡不行的。可以先放小倒管，在加培養(yǎng)基。你可以自己試驗(yàn)下，看自己操作哪種方式容易操作不會(huì)有氣泡。小導(dǎo)管要清洗干凈。小導(dǎo)管先加后加問題不大才對(duì)，滅菌以后小導(dǎo)管里面的空氣可以排盡。這個(gè)過程，先放后放（放完里面有氣泡）去滅菌完，看下效果。

b、倒管里面有氣主要還是你滅菌的時(shí)候沒有控制好，跟先倒培養(yǎng)基或者先放小倒管沒有關(guān)系，注意在滅菌時(shí)候，時(shí)間到了不著急放氣，等溫度和壓力自然降下來再取，另外就是滅菌的時(shí)候試管傾斜一定角度放滅菌鍋里也有助于排氣。

3、如何選擇糞大腸菌群 MPN 法和濾膜法，以及兩者的單位是否能轉(zhuǎn)換？

問題描述：

按照HJ/T 347，糞大腸菌群有兩種監(jiān)測方法，一種是MPN發(fā)，一種是濾膜法，現(xiàn)在碰到幾個(gè)問題比較困惑，想請(qǐng)教一下：

b、包括GB 3838還是GB/T 14848等標(biāo)準(zhǔn)，反正是我看到過的所有對(duì)糞大腸菌群有限值要求的標(biāo)準(zhǔn)，都是以個(gè)/L做單位的，是不是就只能用濾膜法了？或者M(jìn)PN法也可以呢？

c、根據(jù)地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)值中，糞大腸菌群的單位是“個(gè)/L”。

我們多管發(fā)酵的最后單位是“MPN/100mL”及時(shí)最后計(jì)算是把MPN/100mL 轉(zhuǎn)化為"MPN/L"，那我在做最后的評(píng)價(jià)中，我要如何把 MPN/L,和“個(gè)/L”進(jìn)行評(píng)價(jià)？還是說，地表水的檢測方法只能用濾膜法而不能用多管發(fā)酵法。

解答：

a、濾膜法、多管發(fā)酵法及酶底物法這3者之間檢測總大腸菌群不具有可比性。濾膜法檢測的是準(zhǔn)確值，多管發(fā)酵法及酶底物法出具的是估計(jì)值。三者的檢測原理不同，接種取樣的量也不同。故3者之間不能相互轉(zhuǎn)換或比對(duì)。

b.酶底物法單位是MPN/100mL，濾膜法是用個(gè)/L。MPN法的檢出限2MPN/100mL不能簡單等同于20個(gè)/L，否則按個(gè)/L計(jì)的檢出限將大于GB5749標(biāo)準(zhǔn)的限值，這是不合邏輯的。但檢測結(jié)果中，可以用 MPN/100ml乘以10便轉(zhuǎn)化為“個(gè)/L”。

1、生化培養(yǎng)箱和電熱培養(yǎng)箱有什么區(qū)別？

問題描述：

科里上周買了一臺(tái)培養(yǎng)箱，當(dāng)儀器管理員打開后才發(fā)現(xiàn)，里面是電熱培養(yǎng)箱，但我們的采購單上寫的是生化培養(yǎng)箱，這兩者有什么區(qū)別嗎？我們退貨的時(shí)候理由是電熱培養(yǎng)箱是培養(yǎng)細(xì)菌的，生化培養(yǎng)箱是培養(yǎng)五日的。是這么回事嗎？

單位只有三個(gè)培養(yǎng)箱，因?yàn)橛袝r(shí)候微生物需要不同的培養(yǎng)溫度，所以三個(gè)培養(yǎng)箱都在用， BOD培養(yǎng)也在用。今天內(nèi)部檢查，說使用記錄上不能體現(xiàn)微生物培養(yǎng)和BOD培養(yǎng)混用培養(yǎng)箱。微生物要么不寫，要么寫在同一個(gè)培養(yǎng)箱的使用記錄上。

就算混用違規(guī)，難道體現(xiàn)違規(guī)比體現(xiàn)作假的后果更嚴(yán)重嗎？微生物整個(gè)分析過程就一個(gè)培養(yǎng)使用記錄，沒有培養(yǎng)記錄，那數(shù)據(jù)怎么出來？各位老師，有相關(guān)資料表明這兩種情況不能混用培養(yǎng)箱嗎？

解答：

生化培養(yǎng)箱有制冷功能，電熱培養(yǎng)箱沒有制冷功能，當(dāng)環(huán)境溫度高于培養(yǎng)箱內(nèi)的工作溫度時(shí)，生化培養(yǎng)箱仍然能夠保持它的工作溫度，而電熱培養(yǎng)箱的熱由于環(huán)境溫度過高而散不出去，所以就會(huì)出現(xiàn)頻繁的報(bào)警。

b. 《評(píng)審準(zhǔn)則》是這樣規(guī)定的：依據(jù)相關(guān)的規(guī)范、方法和程序要求，當(dāng)影響檢驗(yàn)檢測結(jié)果質(zhì)量情況時(shí)，應(yīng)監(jiān)測、控制和記錄環(huán)境條件。對(duì)諸如生物消毒、灰塵、電磁干擾、輻射、濕度、供電、溫度、聲級(jí)和振級(jí)等應(yīng)予重視，使其適應(yīng)于相關(guān)的技術(shù)活動(dòng)要求。當(dāng)環(huán)境條件危及到檢驗(yàn)檢測的結(jié)果時(shí)，應(yīng)停止檢驗(yàn)檢測活動(dòng)。

檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)應(yīng)對(duì)影響檢驗(yàn)檢測質(zhì)量的區(qū)域的進(jìn)入和使用加以控制，可根據(jù)其特定情況確定控制的范圍。

應(yīng)將不相容活動(dòng)的相鄰區(qū)域進(jìn)行有效隔離，采取措施以防止交叉污染。應(yīng)采取措施確保實(shí)驗(yàn)室的良好內(nèi)務(wù)，必要時(shí)應(yīng)建立和保持相關(guān)的程序。

因此評(píng)審時(shí)有老師就要求微生物和BOD的培養(yǎng)箱和壓力鍋必須分開，如果你要不分開就得舉證，通過檢測空白菌落的方法來證明合用沒有影響來說服老師。

2、水廠化驗(yàn)室建無菌室需要哪些儀器設(shè)備？

問題描述：

主要做大腸菌群的 日處理6～7個(gè)樣品，也不是很多。就是普通污水廠化驗(yàn)室建無菌室需要用到的設(shè)備就行了。申請(qǐng)環(huán)境監(jiān)測業(yè)務(wù)建設(shè)微生物室，做細(xì)菌，大腸桿菌，糞大腸菌，需要購買哪些儀器和器皿？

解答：

化驗(yàn)室只測大腸菌群的話，不用很多設(shè)備，要求也不必太嚴(yán)，但是房間要是套間，外面是緩沖間，十萬級(jí)菌檢室需帶更衣間。 

    
無菌區(qū)要安裝紫外滅菌燈，儀器設(shè)備要有電熱恒溫培養(yǎng)箱、隔水式恒溫培養(yǎng)箱，高壓滅菌鍋可以放在其他房間。

3、如何做好微生物檢測的環(huán)境控制？

問題描述：

不知道各位檢測微生物的版友們?cè)趺醋鑫⑸�物檢測室的質(zhì)控，我們好像是在檢測室的四角放培養(yǎng)皿，然后進(jìn)行培養(yǎng)，有沒有類似的？正確的操作應(yīng)該是怎么做呢？

解答：

a.概述無菌室的菌落空白的多少關(guān)系細(xì)菌指標(biāo)的檢測質(zhì)量。通常無菌室是在微生物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)專辟一個(gè)小房間，可以用塑料板材、玻璃或復(fù)合材料整體建造。面積不宜過大，約4～6 平方米即可，高2.7 米左右，不得有窗（傳遞窗除外）和容易積塵的物件。無菌室外要設(shè)一個(gè)緩沖間，無菌室和緩沖間都必須密閉。室內(nèi)必須有超凈工作臺(tái)。超凈工作臺(tái)其主要功能是利用空氣層流裝置排除工作臺(tái)面上部包括微生物在內(nèi)的各種微小塵埃。通過電動(dòng)裝置使空氣通過高效過濾器具后進(jìn)入工作臺(tái)面，使臺(tái)面始終保持在流動(dòng)無菌空氣的控制之下。

b、技術(shù)要求空白值平均菌落數(shù)：100級(jí)潔凈區(qū)平板雜菌數(shù)平均不得超過1個(gè)菌落，10000級(jí)潔凈室平均不得超過3個(gè)菌落。

     
c、檢驗(yàn)條件

2）檢驗(yàn)用的設(shè)備：SW—CJ型超凈工作臺(tái)，DH4OOOB-電熱恒溫培養(yǎng)箱。

d、檢驗(yàn)項(xiàng)目和檢驗(yàn)方法

①開紫外燈輻照滅菌30分鐘以上，并同時(shí)打開超凈臺(tái)進(jìn)行吹風(fēng)。操作完畢，應(yīng)及時(shí)清理無菌室，再用紫外燈輻照滅菌20分鐘。

②超凈工作臺(tái)開啟的狀態(tài)下，取內(nèi)徑90mm的無菌培養(yǎng)皿若干，無菌操作分別注入融化并冷卻至約45℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15mL，放至凝固后，倒置于30～35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí)，證明無菌后，取平板3～5個(gè)，分別放置工作位置的左中右等處，開蓋暴露30分鐘后，倒置于30～35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí)，取出檢查并記錄。

③有平皿菌落數(shù)的均值即為平均菌落數(shù)，應(yīng)該滿足上面的技術(shù)要求，如不滿足要求應(yīng)對(duì)無菌室進(jìn)行徹底消毒，重復(fù)檢查，直到滿足上面的技術(shù)要求為止。

②檢驗(yàn)周期不超過6個(gè)月。