當(dāng)前所在頁(yè)面：GPC是排阻色譜法中非常最要的應(yīng)用，今天小析姐就接著和大家詳細(xì)聊一聊這個(gè)GPC。
說(shuō)到底，GPC應(yīng)該是液相色譜的一個(gè)分支，是一款在處理大分子物質(zhì)以及高聚物的理想設(shè)備之一。在對(duì)各類食品、農(nóng)產(chǎn)品、水產(chǎn)品中的農(nóng)殘、半揮發(fā)性有機(jī)物分析時(shí)，在有機(jī)樣品萃取物中一般會(huì)含有大分子物質(zhì)，如果不去除這些物質(zhì),則導(dǎo)致色譜柱分離效率降低、進(jìn)樣口和色譜柱的使用壽命縮短,進(jìn)而影響數(shù)據(jù)分析結(jié)。因此，在農(nóng)殘、半揮發(fā)性有機(jī)物的樣品分析前必須進(jìn)行有效的凈化前處理。而傳統(tǒng)的前處理過(guò)程耗時(shí)長(zhǎng)、溶劑消耗量大，所以，GPC大規(guī)模應(yīng)用是一個(gè)必然趨勢(shì)。
凝膠滲透色譜GPC（Gel Permeation Chromatography）也稱作體積排斥色譜[SEC(Size Exclusion Chromatography)]是用溶劑作流動(dòng)相，流經(jīng)多孔填料(如多孔硅膠或多孔樹脂) 作為分離介質(zhì)的液相色譜法。
一、分離機(jī)理
GPC是液相色譜的一個(gè)分支，其分離部件是一個(gè)以多孔性凝膠作為載體的色譜柱，凝膠的表面與內(nèi)部含有大量彼此貫穿的大小不等的空洞。GPC儀的組成：泵系統(tǒng)、（自動(dòng)）進(jìn)樣系統(tǒng)、凝膠色譜柱、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)采集與處理系統(tǒng)。
GPC的分離機(jī)理通常用“空間排斥效應(yīng)”解釋。
分離原理簡(jiǎn)圖
使用外力使含有樣品的流動(dòng)相（氣體、液體或超臨界流體）通過(guò)一固定于柱或平板上、與流動(dòng)相互不相溶的固定相表面。樣品中各組份在兩相中進(jìn)行不同程度的作用。與固定相作用強(qiáng)的組份隨流動(dòng)相流出的速度慢，反之，與固定相作用弱的組份隨流動(dòng)相流出的速度快。由于流出的速度的差異，使得混合組份最終形成各個(gè)單組份的“帶(band)”或“區(qū)(zone)”，對(duì)依次流出的各個(gè)單組份物質(zhì)可分別進(jìn)行定性、定量分析。
二、操作指南
譜圖的表示方法：柱后流出物濃度隨保留值的變化。
提供的信息：高聚物的平均分子量及其分布。根據(jù)所用凝膠的性質(zhì)，可以分為使用水溶液的凝膠過(guò)濾色譜法（GFC）和使用有機(jī)溶劑的凝膠滲透色譜法（GPC）。
只依據(jù)尺寸大小分離，大組分最先被洗提出
色譜固定相是多孔性凝膠，只有直徑小于孔徑的組分可以進(jìn)入凝膠孔道。大組分不能進(jìn)入凝膠孔洞而被排阻，只能沿著凝膠粒子之間的空隙通過(guò)，因而最大的組分最先被洗提出來(lái)。
直徑小于孔徑的組分進(jìn)入凝膠孔道
小組分可進(jìn)入大部分凝膠孔洞，在色譜柱中滯留時(shí)間長(zhǎng)，會(huì)更慢被洗提出來(lái)。溶劑分子因體積最小，可進(jìn)入所有凝膠孔洞，因而是最后從色譜柱中洗提出。這也是與其他色譜法最大的不同。
依據(jù)尺寸差異，樣品組分分離
三、適用范圍
凝膠過(guò)濾色譜適于分析水溶液中的多肽、蛋白質(zhì)、生物酶等生物分子；凝膠滲透色譜主要用于高聚物（如聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯）的分子量測(cè)定。
四、為什么要用GPC方法
1、相對(duì)分子量分布(多分散性指數(shù))對(duì)聚合物的性質(zhì)有重要影響。
2、在相對(duì)分子質(zhì)量分布（多分散性指數(shù)）成為人們關(guān)注的熱點(diǎn)后，經(jīng)典方法卻不能同時(shí)測(cè)定聚合物的相對(duì)分子質(zhì)量分布。凝膠滲透色譜(GPC)的應(yīng)用改善了測(cè)試條件，并提供了可以同時(shí)測(cè)定聚合物的相對(duì)分子質(zhì)量及其分布的方法，使其成為測(cè)定高分子相對(duì)分子質(zhì)量及其分布最常用、快速和有效的技術(shù)。
五、常見問題解答
1、溶劑的選擇？
能溶解多種聚合物；不能腐蝕儀器部件；與檢測(cè)器相匹配。
2、把激光光散射與凝膠色譜儀聯(lián)用？
在得到濃度譜圖的同時(shí)，還可得到散射光強(qiáng)對(duì)淋出體積的譜圖，從而計(jì)算出分子量分布曲線和整個(gè)試樣的各種平均分子量。
3、樣本的準(zhǔn)備？
激光光散射實(shí)驗(yàn)中必須對(duì)樣品嚴(yán)格除塵。溶液除塵是光散射成敗的關(guān)鍵。首先是溶劑除塵，配置測(cè)試樣品的溶劑應(yīng)進(jìn)行精餾，并經(jīng)過(guò)0.2μm超濾膜過(guò)濾后方可使用。配好的溶液也要用0.2μm的超濾膜過(guò)濾。另外，測(cè)試中所用的器械，如：注射器等，使用前要用洗液浸泡，清水強(qiáng)力沖洗。
4、GPC色譜柱選擇
（1）按照樣品所溶解的溶劑來(lái)選擇柱子所屬系列THF、氯仿、DMF必須選擇合適的溶劑來(lái)溶解聚合物。
（2）按照樣品分子量范圍來(lái)選擇柱子型號(hào)
樣品分子量應(yīng)該處在排阻極限和滲透極限范圍內(nèi)，并且最好是處在校正曲線線性范圍內(nèi)
5、GPC儀器對(duì)載體的要求
（1）良好的化學(xué)穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性；
（2）有一定的機(jī)械強(qiáng)度；
（3）不易變形；
（4）流動(dòng)阻力��；
（5）對(duì)試樣沒有吸附作用；
（6）分離范圍越大越好（取決于孔徑分布)等；
（7）載體的粒度愈小，愈均勻，堆積的愈緊密，色譜柱分離效率愈高。
6、進(jìn)樣體積
50-100uL之間(濃度在0.05%-0.5%之間)。
7、GPC系統(tǒng)如何平衡
（1）安裝色譜柱之前，用兩通管連接管路，用流動(dòng)相替換系統(tǒng)后換上GPC柱子。(注意溶劑互溶情況)。
（2）RID平衡操作
分析開始前，用流動(dòng)相沖洗檢測(cè)器流路。流動(dòng)相流速1ml/min，切換到R Flow，使流動(dòng)相通過(guò)檢測(cè)池的樣品池和參比池，沖洗20min左右。
然后切換R Flow 流路數(shù)次，將氣泡趕出檢測(cè)池。
關(guān)閉R Flow，等待基線平穩(wěn)。當(dāng)Balance 值高于50，進(jìn)行Balance 調(diào)整。
（3）色譜柱平衡
等溶劑峰出峰后在經(jīng)過(guò)約一次分析時(shí)間后基線才能走平。
